Алексей Соколов » Публикация

Аннотация Для оценки хлорирующей активности миелопероксидазы и влияния на нее церулоплазмина и лактоферрина в составе комплексов миелопероксидаза-церулоплазмин и миелопероксидаза-церулоплазмин-лактоферин использовали метод хемилюминесценции люминола. Впервые показано: добавление Н2О2 в систему «миелопероксидаза+Cl?+люминол» сопровождается быстрой вспышкой хемилюминесценции; интенсивность вспышки резко снижается в отсутствие миелопероксидазы или Cl?; ингибитор миелопероксидазы – NaN3, перехватчики HOCl – таурин или метионин, а также субстрат пероксидазного цикла миелопероксидазы – гваякол предотвращали свечение. Сделано заключение, что наблюдаемая хемилюминесценция обусловлена функционированием цикла галогенирования миелопероксидазы, а регистрируемая светосумма является мерой хлорирующей активности фермента. Сравнительный анализ влияния церулоплазмина на активность миелопероксидазы, проведенный тремя независимыми методами (хемилюминесценция, определение хлорирующей активности миелопероксидазы с помощью таурина, а также измерение ее пероксидазной активности) показал, что церулоплазмин ингибирует функцию миелопероксидазы. Лактоферин сам по себе не оказывал достоверного влияния на активность миелопероксидазы. Будучи встроенным в тройной комплекс миелопероксидаза-церулоплазмин-лактоферин, лактофеприн не препятствовал ингибирующему эффекту церулоплазмина в отношении миелопероксидазы. Важно отметить, что ингибирующий эффект церулоплазмина в отношении хлорирующей и пероксидазной активности миелопероксидазы, зарегистрированный традиционными методами, проявляется лишь при весьма значительном избытке церулоплазмина по отношению к миелопероксидазе, тогда как метод хемилюминесценции позволяет выявить ингибирование миелопероксидазы при малых стехиометрических соотношениях белков, которые реально имеют место в комплексах миелопероксидаза-церулоплазмин и миелопероксидаза-церулоплазмин-лактоферин. Для выяснения механизма влияния церулоплазмина на миелопероксидазу был проведен анализ его ингибирующей активности, который показал, что церулоплазмин тем эффективнее ингибирует пероксидазную активность миелопероксидазы, чем бо'льшие молекулярные размеры имеет субстрат. Таким образом, ингибирующий эффект церулоплазмина на уровне комплекса миелопероксидаза-церулоплазмин связан со стерическими препятствиями для связывания субстратов миелопероксидазы, возникающими за счет белок-белковых взаимодействий.