Вера Ланцова » Публикация

Аннотация Основными препаратами для компенсации двигательных нарушений у больных миастенией являются ингибиторы холинэстеразы (АХЭ), которые используются в комплексной терапии аутоиммунной вегетативной ганглиопатии, периферических невропатий, нейродегенеративных и других заболеваний. Пациенты по-разному переносят ингибиторы АХЭ с возникновением в ряде случаев выраженных холинергических реакций на введение даже небольших доз препарата. Мы предположили, что неадекватная реакция на ингибиторы АХЭ может быть связана с генетическими вариантами бутирилхолинэстеразы (БХЭ).В работе использовался стандартный набор реактивов фирмы Вектор-Бест для определения активности БХЭ методом Эллмана (1994). Дибукаин ингибирует активность нормальной холинэстеразы в сыворотке и плазме крови и почти не подавляет активность атипичного фермента. Процент ингибирования активности ХЭ дибукаином (дибукаиновое число) – позволяет выявить различные генетические варианты фермента. Модификация метода состояла в том, что определение проводилось в стандартных плоскодонных планшетах для ИФА на приборе фирмы ПИКОН. В планшет вносили по 200 мкл реагента 1 и 4 мкл сыворотки крови (для холостой пробы 4 мкл дистиллированной воды). Планшет устанавливали в термостатируемый шейкер и инкубировали 5 минут при температуре 37 С и 600 об/мин. Затем во все исследуемые лунки вносили по 50 мкл реагента 2. Планшет устанавливали в термостатируемый шейкер и инкубировали 2 минуты при температуре 37 С и 600 об/мин. Затем считывали оптическую плотность через равные промежутки времени в течение 1–3 мин. Количество считываний было не менее трех. Производили расчет среднего изменения оптической плотности за 1 мин в опытной пробе (ΔЕоп/мин) и в холостой пробе (ΔЕх/мин). Если ΔЕоп/мин превышало 0,38 (активность холинэстеразы более 25 000 Е/л), пробу разбавляли в 5 раз физиологическим раствором и повторяли анализ. Полученный результат умножали на 5. Расчет активности холинэстеразы (А) в пробе в Е/л проводили по формуле: А = (DЕоп/мин – DЕх/мин) × фактор. Значение фактора: –195715. Расчет дибукаинового числа (ДЧ) в % по формуле Расчет прозеринового числа проводится аналогично дибукаиновому. Модификация метода позволяет обследовать большее количество пациентов, удешевляет анализ не в ущерб качеству. Данный метод является простым и удобным, имеет хорошие аналитические характеристики: высокую чувствительность, широкую линейную область определения активности фермента, хорошую воспроизводимость. Степень ингибирования ферментативной активности ХЭ в сыворотке крови прозерином (ПЧ) может использоваться для подбора адекватной индивидуальной дозы ингибиторов АХЭ, а также в качестве одного из критериев оценки эффективности проводимой терапии.