Бета-2-микроглобулин (B2M) нековалентно связан с альфа цепью молекулы I класса главного комплекса гистосовместимости. Поступающий в плазму крови белок деградирует в клетках проксимальных почечных канальцев. У больных на длительном гемодиализе выведение B2M практически не происходит, и его концентрация в крови возрастает в десятки раз, что приводит к увеличению вероятности появления аномальных конформаций белка и образования амилоидных фибрилл. Бета-2-микроглобулиновый амилоидоз является серьезным осложнением гемодиализа. Механизм фибриллогенеза в физиологических условиях полностью не выяснен. Моделирование данного процесса in vitro необходимо для его детального изучения, а также для выяснения факторов, способствующих и препятствующих фибриллогенезу. С этой целью мы разработали способ препаративного выделения B2M из диализата больных на хроническом гемодиализе, создали генетическую конструкцию, позволяющую получить рекомбинантный 2M человека в культуре клеток E.coli, а затем довольно быстро и эффективно его очистить. Также был получен рекомбинантный белок слияния B2M с зеленым флуоресцентным белком. Полученные нами рекомбинантные белки не формируют тел включения и могут быть непосредственно экстрагированы из бактерий. При помощи электронной и атомно-силовой микроскопии показано, что полученные варианты B2M формируют фибриллы in vitro. Наличие амилоидных фибрилл подтверждено данными возрастания флуоресценции при комплексировании с тиофлавином Т.
Поделиться публикацией:
Статистика
Нет комментариев