Бюллетень медицинских Интернет-конференций » Архив номеров » Volume 3, issue 3 » Публикация

Аннотация В работе демонстрируется возможность определения распределения эритроцитарных иммунных комплексов по размерам на основе проточной  цитометрии с использованием принципов цифровой микроскопии. Биологическим объектом исследования являлись образцы агглютинатов, приготовленных с использованием ультразвуковых волн. Такая пробоподготовка приводила к значительному укрупнению агглютинатов и, следовательно, к облегчению в их регистрации проточным методом. Экспериментально количественно оценена эффективность действия  ультразвуковой стоячей волны на формирование иммунных эритроцитарных комплексов. Найдены оптимальные  условия, при которых количество эритроцитарных агглютинатов оказывалось максимальным, а их размеры наибольшими: время ультразвукового действия составило 60-90 с, время инкубации образца смеси «кровь-сыворотка» - 3 мин, время регистрации потока исследуемого раствора эритроцитов и их иммунных комплексов – 30 с.   Световой луч, зондирующий исследуемый поток, спектрально фильтровался так, чтобы его спектр совпадал со спектром поглощения света гемоглобином в зеленой области. Тогда достигнутые большие величины размеров эритроцитарных комплексов приводили к тому, что крупные эритроцитарные комплексы в потоке визуально имели красный цвет, а мелкие агглютинаты или одиночные эритроцита представлялись зелеными. Разработанная компьютерная программа позволяла сопоставлять R и G компоненты RGB разложения изображения регистрируемого потока. На основе такого сопоставления осуществлялась бинаризация изображения: фотокадр представлялся в виде некоторого биообъекта красного цвета (регистрируемый крупный эритроцитарный агглютинат)  на  черном фоне (растворитель – физраствор, одиночные эритроциты и их мелкие иммунные комплексы). Следующий фрагмент программы позволял оценивать площадь, занимаемую эритроцитарным агглютинатом, его эффективный размер, а также количество агглютинатов, а, следовательно, распределение иммунных эритроцитарных комплексов по размерам.          Разработанная методика регистрации агглютинатов и определения их размеров нашла приложение для определения групповой принадлежности крови человека. Эксперименты показали, что средние площади, занимаемые эритроцитарными комплексами на фотокадрах, при положительных реакциях агглютинации значительно, в 100 -1000 раз превосходят некие площади «наложения» одиночных эритроцитов на фотокадрах при отрицательных реакциях. Это создает предпосылки к созданию варианта метода проточной цитометрии специально для инструментального определения групповой принадлежности крови человека.